EVALUACIÓN DE MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE PROTEÍNA PARA HOJAS Y RAÍCES DE Tecoma stans
Tecoma stans es una planta ampliamente utilizada en la medicina tradicional mexicana para el tratamiento de diversas enfermedades, principalmente la diabetes. Se ha comprobado que posee actividades terapéuticas como antiinflamatoria, anticancerígena, antibacteriana, antifúngica, antioxidante, hepatoprotectora y actúa en la cicatrización de heridas. En el presente trabajo se evaluaron cuatro metodologías diferentes de extracción de proteína utilizando plantas de T. stans, con la finalidad de establecer un único protocolo para estudios proteómicos de hoja y raíz. Para la extracción de proteína se usó una muestra con 0.25 g de hoja y otra con 0.5 g de raíz. Los extractos fueron cuantificados mediante la técnica de Bradford, posteriormente se evaluó la cantidad de proteína soluble que se obtuvo de cada protocolo, así como para cada tipo de órgano. Las muestras de proteína de cada protocolo se cargaron a una electroforesis SDS-PAGE al 9 y al 12%, con el fin de observar el número de bandas, resolución y nitidez de las muestras proteicas. El análisis de varianza del número de bandas obtenidas sugiere que tanto el tipo de órgano, el método de extracción y su interacción tienen efectos significativos en cada experimento. Con base a las interacciones de las medias obtenidas en la prueba Tukey con 95% de confianza. El mejor efecto se obtuvo al utilizar TCA/acetona para extraer proteína a partir de raíces (22±1 bandas). Por lo tanto, en este trabajo estableció la metodología de extracción óptima, obteniendo resultados satisfactorios que pueden permitir estudios proteómicos desde tejidos de T. stans.
EVALUACIÓN DE MÉTODOS DE EXTRACCIÓN DE PROTEÍNA PARA HOJAS Y RAÍCES DE Tecoma stans
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DOI: 10.37572/EdArt_2809263381
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Palavras-chave: Extracción de proteína de plantas, TRI-Reagent, TCA/Acetona, ammonium sulfate precipitation.
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Keywords: Plant protein extraction, TRI-Reagent, TCA/acetone, SDS-PAGE.
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Abstract:
Tecoma stans is a plant widely used in traditional Mexican medicine for the treatment of various diseases, mainly diabetes. It has been proven to possess therapeutic activities such as anti-inflammatory, anticancer, antibacterial, antifungal, antioxidant, hepatoprotective, and it aids in wound healing. In the present work, four different methodologies for total protein extraction using T. stans plants were evaluated, with the aim of establishing a single protocol for proteomic studies from leaf and root tissue. For protein extraction, 0.25 g of leaf and 0.5 g of root were used. The extracts were quantified using the Bradford technique, and subsequently, the amount of soluble protein obtained from each protocol was evaluated, as well as for each type of organ. The protein samples from each protocol were loaded onto a 9 and 12% SDS-PAGE gel to observe the number of bands, resolution, and clarity of the protein samples. The analysis of variance of the number of bands obtained suggests that both the type of organ, the extraction method, and their interaction have significant effects in each experiment. Based on the interactions of the means obtained in the Tukey test with 95% confidence. The best effect was obtained by using TCA/acetone to extract protein from roots (22±1 bands). Therefore, in this work, the optimal extraction methodology was established, obtaining satisfactory results that may allow proteomic studies from T. stans tissues.
- Eduardo Anaya Esteban
- Mario Valera Zaragoza
- Ariana Arlene Huerta Heredia