DESARROLLO DE TÉCNICAS MOLECULARES BASADAS EN PCR PARA LA DETECCIÓN DE CAMPYLOBACTER FETUS
Campylobacter fetus actualmente es reconocida dentro de las 24 especies de Campylobacter, es un bacilo gramnegativo curvo o en forma de espiral, que crece entre los 25° C y los 37° C esta bacteria posee movilidad gracias a la presencia de un flagelo polar. El ganado bovino es el reservorio principal de este microorganismo, en donde coloniza el tracto intestinal y el genital, provocando abortos en las hembras preñadas. Este microorganismo también se ha aislado en aves de corral, caballos y cerdos. La campylobacteriosis es una enfermedad zontica, transmitiéndose al humano a través de alimentos de origen animal mal cocinados. El cultivo bacteriano en agar es la forma actual de diagnóstico, un método tardado y con baja especificidad, es necesario implementar nuevas formas de diagnóstico más sensibles y específicas como las pruebas de PCR. El objetivo del presente estudio fue estandarizar un método de diagnóstico por PCR, para esto, se seleccionaron genes específicos de Campylobacter fetus como el gltx1 y 16S, se diseñaron sondas especie específicas para el gen gltx1 fueron el Fw 5’-3’ (GCCGCAAAAACAGCAGGTAAGC), Rv 5’-3’ (TTTCAAGCGAACGGCTGCTGG) y Probe 5’-3’ (GTGATGACGATGTTTTAAGCAATCCCC); y para el gen 16S fueron el Fw 5’-3’ (CGAAGAACCTTACCTGGGCTTG), Rv 5’-3’ (GACAGCCGTGCAGCACCTGT) y Probe 5’-3’ (ACTTTCTAGCAAGCTAGCACTCTCTTATCT). Con el diseño de las sondas se estandarizo una prueba de PCR punto final y una prueba de qPCR, esta metodología ofrece mayor sensibilidad y especificidad para el correcto diagnóstico de Campylobacter fetus.
DESARROLLO DE TÉCNICAS MOLECULARES BASADAS EN PCR PARA LA DETECCIÓN DE CAMPYLOBACTER FETUS
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DOI: 10.37572/EdArt_2810243147
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Palavras-chave: PCR, Campylobacter, patógenos, bovinos.
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Keywords: PCR, Campylobacter, pathogens, bovine.
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Abstract:
Campylobacter fetus is currently recognized among the 24 species of Campylobacter. It is a curved or spiral-shaped gram-negative bacillus that grows between 25° C and 37° C. This bacterium is mobile thanks to the presence of a polar flagellum. Cattle are the main reservoir of this microorganism, where it colonizes the intestinal and genital tracts, causing abortions in pregnant females. This microorganism has also been isolated in poultry, horses and pigs. Campylobacteriosis is a zontic disease, transmitted to humans through poorly cooked food of animal origin. Bacterial culture on agar is the current form of diagnosis, a slow method with low specificity. It is necessary to implement new, more sensitive and specific forms of diagnosis such as PCR tests. The aim of this study was to standardize a PCR diagnostic method. For this, Campylobacter fetus-specific genes such as gltx1 and 16S were selected. Species-specific probes were designed for the gltx1 gene: Fw 5’-3’ (GCCGCAAAAACAGCAGGTAAGC), Rv 5’-3’ (TTTCAAGCGAACGGCTGCTGG) and Probe 5’-3’ (GTGATGACGAGTTTTAAGCAATCCCC); and for the 16S gene: Fw 5’-3’ (CGAAGAACCTTACCTGGGCTTG), Rv 5’-3’ (GACAGCCGTGCAGCACCTGT) and Probe 5’-3’ (ACTTTCTAGCAAGCTAGCACTCTCTTATCT). With the design of the probes, an end-point PCR test and a qPCR test were standardized. This methodology offers greater sensitivity and specificity for the correct diagnosis of Campylobacter fetus.
- Edgar Ivan Gonzalez Jimenez
- Lily Xóchitl Zelaya Molina
- Saúl Pardo Melgarejo
- José Herrera Camacho
- Marcelino Álvarez Cilva
- Carlos Alberto Ramos Jonapa