ALTERACIÓN EN VIABILIDAD CELULAR, DAÑO EN ADN Y CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DE Hsp70 EN LEUCOCITOS HUMANOS EXPUESTOS A RADIACIÓN UVA Y CALOR.
Las células humanas puedes sufrir estrés por exposición continua a radiación solar, donde la radiación ultravioleta (UV) y el calor son las que generan mayor daño. La radiación UV se clasifica por su longitud de onda en: UVA, UVB y UVC. La radiación UVA es absorbida por el 70-80% de las células de la dermis. Tanto la UVA y el calor generan estrés oxidativo, afectando proteínas, ADN y lípidos. Así mismo el calor, favorece el envejecimiento, ya que induce la producción de metaloproteinasas y desnaturalización de proteínas. Para mantener la homeostasis, la célula sobre expresa proteína Hsp70, que regula el plegamiento, renaturalización o destrucción de proteínas en formación o dañadas. El objetivo de este proyecto fue determinar el cambio en el número de células vivas, el daño en el ADN y la expresión de Hsp70 en leucocitos humanos expuestos a radiación UVA y calor. Material y métodos: Se aislaron leucocitos de sangre total proveniente de humanos mediante Ficoll Histopaque®, se alicuotaron las células y se sometieron a radiación UVA por 0, 1, 2 y 3 horas utilizando una lampara emisora de radiación a 365nm y a calor a 37, 40, 42 y 44 °C durante una hora. Posteriormente se evaluó el número de células vivas por mL, se extrajo su ADN mediante DNAzol® para evaluar su fragmentación en geles de agarosa y se analizó la expresión de Hsp70 mediante PAGE-SDS y Western Blot-ECL. Resultados: Se encontró una disminución significativa en el número de células vivas por mL en los leucocitos expuestos a estrés térmico y radiación UVA. También se observó un aumento en la expresión de Hsp70 por radiación UVA a 1 y 2 horas de exposición, con caída a 3 horas y por calor a 40 y 42 °C, decayendo en 44 °C. Finalmente, se encontró fragmentación del ADN en las muestras expuestas a 2 y 3 horas con radiación UVA y una fragmentación discreta al irradiar 1 hora con radiación UV y a 44 °C. Conclusión. La radiación ultravioleta y el calor generan estrés celular, modifican el número de células vivas, la expresión de Hsp70 y el daño al ADN en leucocitos humanos.
ALTERACIÓN EN VIABILIDAD CELULAR, DAÑO EN ADN Y CAMBIOS EN LA EXPRESIÓN DE Hsp70 EN LEUCOCITOS HUMANOS EXPUESTOS A RADIACIÓN UVA Y CALOR.
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DOI: 10.37572/EdArt_3105238352
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Palavras-chave: Estrés; Hsp70; Radiación ultravioleta; leucocitos.
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Keywords: Stress; Hsp70; ultraviolet radiation; leukocytes.
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Abstract:
Human cells can be stressed by continuous exposure to solar radiation, where ultraviolet (UV) radiation and heat do the most damage. UV radiation is classified by its wavelength into: UVA, UVB and UVC. UVA radiation is absorbed by 70-80% of the cells of the dermis. Both UVA and heat generate oxidative stress, affecting proteins, DNA and lipids. Likewise, heat favors aging, since it induces the production of metalloproteinases and protein denaturation. To maintain homeostasis, the cell overexpresses the Hsp70 protein, which regulates the folding, renaturation, or destruction of forming or damaged proteins. The objective of this project was to determine the change in the number of living cells, DNA damage and Hsp70 expression in human leukocytes exposed to UVA radiation and heat. Material and methods: Leukocytes were isolated from whole blood from humans using Ficoll Histopaque®, the cells were aliquoted and subjected to UVA radiation for 0, 1, 2 and 3 hours using a radiation emitting lamp at 365nm and heat at 37, 40, 42 and 44 °C for one hour. Subsequently, the number of living cells per mL was evaluated, their DNA was extracted using DNAzol® to evaluate their fragmentation in agarose gels, and the expression of Hsp70 was analyzed using PAGE-SDS and Western Blot-ECL. Results: A significant decrease in the number of live cells per mL was found in leukocytes exposed to thermal stress and UVA radiation. An increase in Hsp70 expression was also observed by UVA radiation at 1 and 2 hours of exposure, falling at 3 hours, and by heat at 40 and 42 °C, falling at 44 °C. Finally, DNA fragmentation was found in the samples exposed to 2 and 3 hours with UVA radiation and a discrete fragmentation when irradiated for 1 hour with UV radiation and at 44 °C. Conclusion. Ultraviolet radiation and heat generate cell stress, modify the number of living cells, Hsp70 expression and DNA damage in human leukocytes.
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Número de páginas: 16
- Sergio Hugo Sánchez Rodríguez
- David Alejandro García López
- Rosa Gabriela Reveles Hernández
- Rosa María Ramírez Santoyo
- Luz Elena Vidales Rodríguez
- María Argelia López Luna